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过敏性休克死亡豚鼠脏器中IgE蛋白表达

时间:2019-06-24    点击: 次    来源:网络转载    作者:佚名www.relunwen.com - 小 + 大

过敏性休克死亡豚鼠脏器中ige蛋白表达

    【关键词】  过敏性反应

    【摘要】  目的: 检测过敏性休克死亡豚鼠脏器中ige的蛋白表达情况,探讨法医学鉴定过敏性休克的病理形态学诊断标准. 方法: 建立豚鼠异种血清过敏性休克模型,利用组织芯片技术、采用免疫组化方法sp法检测25例过敏性休克死亡鼠脏器中ige蛋白的表达情况,并与常规切片比较. 结果: 过敏性休克死亡豚鼠在肺小血管壁及其血管周围 ,气管黏膜上皮内、小血管壁及结缔组织和脾髓质中ige蛋白呈阳性表达,而肝、肾、心等脏器中ige蛋白表达呈阴性. 结论: 过敏性休克时,肺、气管和脾组织中可检见ige.

  【关键词】  过敏性反应;ige;组织芯片技术;免疫组织化学;豚鼠

  0引言

  过敏性休克是ⅰ型变态反应,少数短时间内发生死亡[1]. 豚鼠在致敏后血清总ige明显升高,抗原再次攻击前血清ige抗体明显高于再次攻击后休克死亡者,提示ige可能在组织中存留. 我们在200401/200410利用组织芯片技术、采用免疫组化方法检测过敏性休克死亡豚鼠脏器中ige的表达情况,并与常规病理技术进行比较.

  1材料和方法

  1.1材料

  多人混合的正常血清,井冈山学院2003级妇幼班部分学生提供. 纯种hartly豚鼠40只,雌雄不拘,体质量200~250 g,随机分为正常对照组(8只)和实验组(32只),由江西医学院实验动物中心提供. 兔抗人ige抗体、sp试剂盒及dab显色液均购自dako生物技术有限公司武汉分公司. 过敏性休克动物模型的建立参照文献 [2]. 实验组豚鼠的一侧后爪掌皮内注致敏原0.15~0.20 ml,形成皮丘. 致敏后饲养20 d后(饲养期间共死亡5只,其中实验组4只,对照组1只)于胸前区搏动最明显处刺入心腔,见有搏动性回血后注射人血清1 ml,诱发过敏性休克,休克发生率100%,死亡率89.3%. 取心、肺、肝、肾、脾、胃、肠、甲状腺、气管等组织,40 g/l甲醛液固定,备作组织芯片,行he染色和免疫组化染色. 对照组豚鼠的一侧后爪掌皮内注射生理盐水0.15~0.20 ml,饲养20 d后,心腔内注射生理盐水1 ml,未出现上述过敏症状,未死亡. 断头处死后取组织作上述处理.

  1.2方法

  组织芯片的制备参照文献[3],用手工方法制作组织芯片. 免疫组化染色sp法染色按试剂盒说明书进行,以pbs代替一抗、二抗、抗生素蛋白链霉亲和素辣根过氧化物酶作对照. 在光学显微镜下对切片ige染色阳性情况进行半定量评估,阳性反应呈棕黄色,定位于细胞质、血管壁及结缔组织内. 评分标准: ① 按细胞显色有无及深浅计分: 无显色0分,浅黄色1分,棕黄色2分,黄褐色3分. ② 按显色区域的比例计分: 无显色区域0分,显色区域10%~15% 1分,显色区域16%~50% 2分,显色区域51%~100% 3分. 再以两项计分之积判断结果: 2分以下为阴性(-),2分为弱阳性(+),3分为阳性(),4分以上为强阳性(). 统计学处理采用秩和检验.

  2结果

  实验组豚鼠均于抗原攻击后0.5~1 min开始出现活动减少,继而竖毛,躁动,呼吸困难,四肢软弱,抽搐,大小便失禁,最后25只豚鼠死亡;3只豚鼠症状逐渐缓解. 死后解剖检查,肉眼所见: 实验组和对照组各脏器均呈现急骤死亡的一般病理改变;镜下所见: 实验组在肝、肾、脾间质及气管与胃肠黏膜下见少量嗜酸性粒细胞浸润,对照组未见嗜酸性粒细胞浸润,实验组肺水肿较对照组明显. 在9个组织芯片中,对照组7例,在肺、肝、肾、脾、胃、肠等9个脏器组织均呈阴性反应;实验组25例,肺小血管壁及血管周围均出现浅黄色或棕黄色阳性区域,气管黏膜上皮细胞质、小血管壁及结缔组织出现浅黄色或棕黄色区域;脾髓质出现浅黄色区域和棕黄色阳性细胞;心、肝、胃、肠等脏器组织无显色. 常规病理切片的肺、气管、肾、脾等4个脏器组织行免疫组化sp染色,对照组所有脏器组织呈阴性反应,实验组休克死亡25例肺小血管壁及血管周围均出现浅黄色或棕黄色阳性区域,气管黏膜上皮细胞质、小血管壁及结缔组织出现浅黄色或棕黄色区域;脾髓质出现浅黄色区域和棕黄色阳性细胞;心、肝、胃、肠等脏器组织无显色. 组织芯片免疫组化染色与常规病理切片免疫组化染色比较,阳性强度及范围均基本一致,无显著性差异(p>0.05,表1).表1组织芯片与常规病理切片免疫组化染色结果比较(略)

  3讨论

  临床大量实践证实,各种类型的变态反应血清中总ige均升高[4]. 我们在肝、心、肾等组织均末检出ige,在肺、气管、脾等组织中检出多量ige,提示肺、气管可能是过敏性休克中受累最重的器官. 肺、气管、脾检出ige可能有助于从病理形态学角度诊断过敏性休克. 组织芯片容纳的信息量大,省时、省力、节约试剂,又减少了实验误差. 而且这两种方法免疫组化标记结果基本一致(p>0.05),与fernebro等[5]比较20例直肠癌组织微阵列和大切片p53蛋白表达的结果一致. 本实验576个阵列点,有效点数91%. 比文献[6]报道的组织微阵列制作效率已从早期的70%左右提高到了90%略高,可能是与本次实验取之新鲜组织而不是存档蜡块组织有关. 我们认为,可从组织选取、阵列蜡块制作和切片等多个环节加以改进,方可提高组织微阵列制作的效率.

  【参考文献】

  [1] 左止津,祝家镇. 过敏性休克死亡体内白三烯变化的研究 [j]. 中国法医学杂志,1992;7(3):141.

  [2] 郭薇,陈玉川,成建定,等. 豚鼠过敏性休克ige 和c5复合物分布及ckit蛋白表达[j]. 中山医科大学学报,2002;23(2):103-104.

  [3] 赵坡, 辛茂,王德文. 用引物介导原位标记方法检测脑胶质瘤染色体畸变[j]. 中华病理学杂志,1996;25:291.

  [4] 周亦武. 药物过敏性休克的病理变化及其法医学鉴定[j]. 中国法医学杂志,1993;5(3):167.

  [5]  fernebro  e, dictor  m, bendahl  po, et al. evaluation  of  the tissue  microarray  technique  for  immunohistochemical analysis in rectal cancer [j]. arch pathol lab med, 2002;126(6):702-705.

  [6]  torhorst j, bucher c, kononen j, et al. tissue microarray for rapid linking of molecular changs to clinical endpoints [j]. am  j  pathol, 2001;159(6):2249-2256.

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